Er der andre metoder til at rense PCR-produkter?
Er der andre metoder til at rense PCR-produkter?

Video: Er der andre metoder til at rense PCR-produkter?

Video: Er der andre metoder til at rense PCR-produkter?
Video: Афины — греческий образ жизни. Легко тут ли жить? И конечно достопримечательности 2024, November
Anonim

Til de applikationer, der kræver PCR oprydning eller validering af PCR resultater, der er to metoder generelt fulgt: PCR produkt isolering under anvendelse af en søjle og gel oprensning fra en agarosegel.

Hvilken type kromatografi bruges her til at oprense PCR-produkter?

For at oprense PCR-produkterne anvendes størrelsesudelukkelseskromatografi. Dette fanger små molekyler som protein, primere og nukleotider, mens store molekyler som PCR-produkter er for store til at komme ind i perlerne og passere gennem søjlen ind i opsamlingsrørene.

Og hvordan renser man DNA? Dybest set kan du rense din DNA prøver ved at lysere dine celle- og/eller vævsprøver ved at bruge den mest passende procedure (mekanisk afbrydelse, kemisk behandling eller enzymatisk fordøjelse), isolere nukleinsyrerne fra dets kontaminanter og udfælde det i en passende bufferopløsning.

Derudover, hvorfor renser vi PCR-produkt?

Oprensning af DNA fra en PCR reaktion er typisk nødvendig for nedstrøms brug og letter fjernelse af enzymer, nukleotider, primere og bufferkomponenter. Almindeligt anvendte metoder anvender spin-søjler indeholdende en silicamatrix, hvortil DNA selektivt kan bindes i nærvær af kaotrope salte.

Hvorfor skal DNA'et renses?

Vi ren op DNA fra vandige opløsninger for at fjerne buffersalte, enzymer eller andre stoffer, der kan påvirke downstream-applikationer. Eksempler inkluderer PCR-reaktion ren op, ren op efter restriktionsfordøjelser og ren op af genomisk eller plasmid DNA forurenet med cellulære proteiner/rester.

Anbefalede: