Hvor meget koster det at transformere en ligering?

2024 Forfatter: Miles Stephen | [email protected]. Sidst ændret: 2023-12-15 23:34

Transformation . Tilsæt mellem 1-5 µl ligering blanding til kompetente celler til transformation . Udvidet ligering med PEG forårsager et drop-off in transformation effektivitet (Hurtig Ligation Kit). Elektroporation anbefales til store konstruktioner (>10.000 bp).

Heraf, hvor meget ligeringsprodukt skal jeg bruge til transformation?

Transformation . Tilsæt mellem 1-5 µl ligering blanding til kompetente celler til transformation . Udvidet ligering med PEG forårsager et drop-off in transformation effektivitet (Hurtig Ligation Kit). Elektroporation anbefales til store konstruktioner (>10.000 bp).

Efterfølgende er spørgsmålet, hvad er Ligation og transformation? I et typisk kloningseksperiment indsætter forskere først et stykke DNA, såsom et gen, i et cirkulært stykke DNA kaldet et plasmid. Dette trin bruger restriktionsenzymer og DNA-ligase og kaldes en ligering . Efter en ligering , er næste trin at overføre DNA'et til bakterier i en proces kaldet transformation.

Efterfølgende kan man også spørge, hvor meget DNA skal der til en ligering?

Den samlede koncentration af vektor + insert bør være mellem 1-10 Μg/ml for effektiv ligering . Vektor: Molforhold mellem 1:1 og 1:10 anbefales (1:3 er typisk). Hvis du er usikker på din DNA koncentrationer, udføre flere ligeringer med varierende forhold.

Hvor længe kan man opbevare en ligationsreaktion?

Ligeringer kan gøres ved stuetemperatur eller køligere (tænk 12-16°C) natten over eller endda i et par dage, hvis du har virkelig travlt. Du kan også opbevare en ligering i køleskabet og tag det ud senere for at fortsætte ligeringen ved stuetemperatur i ca lang efter behov.