Hvordan beregnes DNA-koncentrationen ved hjælp af spektrofotometer?
Hvordan beregnes DNA-koncentrationen ved hjælp af spektrofotometer?

Video: Hvordan beregnes DNA-koncentrationen ved hjælp af spektrofotometer?

Video: Hvordan beregnes DNA-koncentrationen ved hjælp af spektrofotometer?
Video: DNA Quantitation Using a Spectrophotometer 2024, Marts
Anonim

DNA-koncentration er anslået af måling af absorbansen ved 260nm, justering af A260 måling for turbiditet ( målt efter absorbans ved 320 nm), multiplicerende ved fortyndingsfaktoren, og ved brug af forholdet, som en A260 på 1,0 = 50 µg/ml rent dsDNA.

Folk spørger også, hvordan finder man koncentrationen og renheden af DNA?

At vurdere DNA renhed , mål absorbans fra 230 nm til 320 nm for at detektere andre mulige kontaminanter. Den mest almindelige renhedsberegning er forholdet mellem absorbansen ved 260 nm divideret med aflæsningen ved 280 nm. God kvalitet DNA vil have et A260/EN280 forhold på 1,7-2,0.

Ligeledes, hvad er en god DNA-koncentration? EN godt kvalitet DNA prøven skal have et A260/EN280 forhold på 1,7-2,0 og en A260/EN230 forhold på mere end 1,5, men da følsomheden af forskellige teknikker over for disse forurenende stoffer varierer, bør disse værdier kun tages som vejledende for renheden af din prøve.

Med hensyn til dette, hvordan beregner NanoDrop DNA-koncentrationen?

Du multiplicerer værdien af absorbans ved 260 nm med en fast faktor (det er 50 for DNA ), og du får DNA koncentration . Voilá. (Ok, det er teknisk set A260 af en 10 mm tyk prøve, der er ganget med 50; NanoDrop udtrykker A260, som om prøven var 10 mm tyk, som i en standardkuvette).

Hvorfor skulle vi bruge et spektrofotometer til at kvantificere vores DNA?

EN spektrofotometer er i stand til at bestemme de gennemsnitlige koncentrationer af nukleinsyrerne DNA eller RNA til stede i en blanding, såvel som deres renhed. Ved brug af Beer-Lambert-loven det er muligt at relatere mængden af absorberet lys til koncentrationen af det absorberende molekyle.

Anbefalede: